慢性疼痛是引起神经元和神经胶质细胞特征性变化的一般和破坏性条件，其中异常的胶质瘤响应对慢性疼痛患者的中枢神经系统有明显作用。目前的主要未解决问题之一是发现了许多与慢性疼痛发展和维持相关的神经生物学机制，那么，下面一起了解下ChIP-seq+RNA-seq：揭示慢性疼痛如何持续发生!

　　增强子是DNA上的顺式作用调控区，允许多个转录因子(TFs )结合，影响与其不同距离的基因表达，H3K4me1被认为是潜在活性增强子的marker。

　　据报道，在巨噬细胞中，这些潜在增强子的一部分依然存在，在以前的事件中起到了分子印迹的作用。 由于不同炎症介质的刺激，出现了新的增强子峰，在刺激消除后，通过研究神经损伤引起的小胶质瘤增强子损伤的特异性变化，明确神经系统免疫细胞的表观遗传对慢性疼痛的影响。

　　ChIP-seq研究材料

　　1 .四组脊髓神经结扎(SNL )和假手术) sham ) )后7天对小鼠脊髓胶质细胞进行RNA-seq。

　　2 .四组脊髓神经结扎(SNL )和假手术)假手术后7天，小鼠脊髓胶质细胞应用H3K4me1抗体浓缩进行芯片ChIP-seq。

　　应用流式细胞术、RNA-seq和h3k4me 1芯片- seq分析细胞组成、全基因组转录变化和增强子变化，研究小鼠外周SNL后脊髓免疫应答。

　　1、SNL后脊髓免疫反应的特点

　　慢性疼痛研究有很长一段时间的争论，脊髓免疫应答仅限于神经胶质细胞，还是包括外周巨噬细胞? 常见的流式细胞仪无法区分这两种脊髓细胞群。 包括中性粒细胞、浸润巨噬细胞、t细胞和b细胞，本文利用嘌呤受体P2ry12鉴定卵黄囊来源的常在胶质细胞，并通过检测Ly6G-、Ly6C-、CD3-和CD19-阳性群鉴定脊髓中其他免疫细胞的比例。

　　检查结果表明，SNL后7天这些细胞类型未明显渗透脊髓，分离的细胞92 %99 %为CD45-阳性免疫细胞，其中98 %99 %为常在胶质细胞。 清点少量中性粒细胞、t细胞和b细胞后，细胞数未因损伤而发生变化。

　　2、分离的脊髓胶质细胞的全基因组转录谱

　　RNA-seq结果显示，组织蛋白酶(Ctss )、趋化因子受体(Cx3cr1) )等已知的神经胶质细胞基因在神经胶质细胞中高表达，与sham组相比，17个基因在SNL样本中明显表达上升，蛋白- - 主要分为4类) )细胞活化和免疫应答相关基因，inter对这些上调基因和小胶质细胞上调基因进行了GO富集分析，发现包括干扰素、干扰素、补体信号转导在内的免疫反应相关terms明显富集，

　　3、RNA-seq结果的蛋白水平和功能验证

　　损伤相关基因的表达上调伴随着蛋白水平的可检测变化，WB结果显示SNL后的胶质细胞中Stat1明显上调，与RNA-seq的结果一致。

　　为了验证网络预测结果，提示IFN在神经损伤后可能引起神经胶质细胞几个重要基因的表达不全。 当IFN刺激培养细胞时，FCGR1、FCGR2B、STAT1、B2M和CCL2的表达上升，使用未分化的人单核细胞系进行了研究。 蛋白-蛋白相互作用网络和GO浓缩分析结果确定了与干扰素信号转导相关的蛋白质簇，但FCGR3没有变化。

　　以上介绍的就是ChIP-seq+RNA-seq：揭示慢性疼痛如何持续发生，如需了解更多，可随时联系我们!