随着5hmC-Seal高通量检测技术在多发性骨髓瘤治疗中的新进展，为了预测MM预后，这项研究成果引起了许多专家的兴趣和讨论，发现了基于更准确的5-羟甲基胞嘧啶(5hmC )的新型肿瘤生物标志物。 那么，下面一起了解下5hmC-Seal或可成为预测多发性骨髓瘤预后的新型标志物吧!

　　研究背景

　　MM是一种异质性很强的以浆细胞恶性克隆性增生为主的淋巴系统肿瘤，生存期为几个月至几年。 免疫调节剂、蛋白酶体抑止剂等多种靶向药的出现，明显提高了MM患者的预后， 对复发患者的治疗手段也非常有限，且疗效差，疾病进展快，患者生存期短。 但部分高危及复发难治性患者的生存质量并未得到改善。因此，对MM诊疗的探索一直是血液病学界关注的重要的点和难点。

　　DNA甲基化和羟甲基化是重要的表观遗传学修饰，在多种恶性肿瘤的发生发展中起着重要作用。 近年来，许多研究表明，广泛存在于哺乳类基因组中。 5-HMC是DNA脱甲基化调控过程的重要中间产物，研究表明基因组的5-HMC水平和mRNA的表达水平有很强的正向关联，DNA异常甲基化5-甲基胞嘧啶(5mC )和MM疾病的预后与生存密切相关，不同组织基因组的表观修饰水平和模式具有组织特异性，但5-羟甲基胞嘧啶)5hmC )的相关研究很少。 是重要的基因调控参与者。

　　本研究小组在前期发现外周血游离DNA(cfdna )中的5hmC与弥漫性大b细胞淋巴瘤)另一淋巴增殖性恶性肿瘤)的复发或死亡有关。 因此，研究cfDNA中5hmC的表达情况对MM的预后具有重要的科学意义，为提高MM的诊治提供新思路。

　　关于5hmC-Seal技术

　　5hmC-Seal技术是芝加哥大学教授、HHMI研究员何川教授于2011年发明的， 用于特异捕获和测定基因组中5hmC修饰分布的二代测序技术。 在T4 Phage中，5-HMC被转移酶bGT催化，由于该反应温和、迅速、特异性好， 通过化学合成，何教授实验室修饰了UDP-glucose，攻击基质UDP-glucose，UDP作为离去基团脱离，1分子的葡萄糖基修饰为1分子的5hmC。人工全合成了带叠氮修饰的N3-UDP-glucose。是理想的5hmC标记反应。 该技术改造了T4 phage中天然存在的糖基化反应。 N3基因其小的位阻和电中性的特点， 并且筛选出的苯并八环炔高速，特异地在N3和温和的水相中可以发生无催化剂的点击化学。与原bGT催化反应完全兼容。 特别是以N3为代表的生物正交官能团不会与天然生物系内的化学官能团发生反应，因此保证了反应所需的特异性。 结尾，用能与环乙炔相连的biotin进行下游一系列的定量和浓缩反应。 例如，用缓冲液洗涤，将不含5hmC修饰的片段洗涤，将带有biotin的5hmC修饰片段固定在表面修饰avidin的珠子上，用PCR扩增后得到5hmC的二代测序文库。5hmC-Seal的技术优势

　　灵敏度高的单分子化学标记

　　化学改造N3-UDP-glucose可以在转移酶bGT的催化下短时间内对5hmC进行单分子的高速反应，然后生物交叉化学可以敏锐标记它，保证没有其他副反应。

　　特异性DNA的片段的捕获

　　特异性DNA的片段捕捉共价键的biotin保证了在捕捉过程中不受传统抗原抗体作用亲和性的限制，进而特异性地捕捉含有5hmC的DNA的片段。

　　低水平的DNA分解

　　亚硫酸盐反应体系偏酸性， 5hmC-seal技术在温和的水相中进行，具有长时间的高温循环反应和大量的自由基，不可避免地会对大量的DNA造成不可逆的损伤。大限度地阻止了DNA的分解。

　　构建ng级的起始量文库

　　由于该技术高速/特异的捕获效率和低限度的DNA分解，可以有效地应用于含有游离核酸和流式细胞等各种宝贵临床样本的微量DNA开始的临床场景。

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